Az elhízással kapcsolatos adipokinek és a váll osteoarthritis

Egyre inkább megértik, hogy az elhízás és az osteoarthritis (OA) közötti összefüggést részben az adipokinek, például a leptin (LEP), az adiponectin (ADIPO) és a rezisztin, szisztémás, gyulladásos hatása közvetíti. Az elhízás és az OA társulása a nem súlyt hordozó ízületekben, például a kézben, további alátámasztást ad ehhez a hipotézishez. A LEP-nek és az rezisztinnek erős proinflammatorikus hatását javasolták 3,4, míg az ADIPO szerepe egy térdízületben nem egyértelmű, mivel egyesek gyulladáscsökkentő hatást mutatnak 5, mások pedig gyulladáscsökkentő hatást mutatnak 6. Hasonlóképpen, az ADIPO receptorokat csak a térdízületben azonosították 6 .

Egyetlen tanulmány sem vizsgálta az elhízás és a váll OA közötti epidemiológiai összefüggést, vagy nem azonosította ezeket az elhízási hormonokat a vállízületben. Vizsgálatunk célja annak meghatározása volt, hogy az OA-ban szenvedő betegek váll-szinoviális folyadékában (SF) vannak-e LEP, ADIPO és rezisztin adipokinek, valamint megvizsgálni ezeknek a hormonoknak a test habitusának mértékéhez való viszonyát.

Olyan betegeket toboroztunk, akik 2009 és 2011 között választható artroszkópos rotátor mandzsetta javításra vagy vállprotézis műtétre vártak. Kizártuk azokat a betegeket, akiknek kórtörténetében volt vállműtét, korábbi szteroidinjekció, posztraumás ízületi gyulladás vagy gyulladásos arthropathia. Az OA diagnózisa érdekében vállprotézisen átesett betegeket használtuk az ízületi kondrociták forrásaként. A vizsgálati protokollt az Emberi Tárgy Felülvizsgálati Bizottság hagyta jóvá.

Demográfiai adatokat gyűjtöttünk, beleértve a testtömeg-indexet (BMI) és a derék kerületét (WC). Vizsgálati kohorszunknak legalább 1 kondrális felülete volt 3. vagy 4. fokozatú károsodással, az Outerbridge osztályozás 7 alapján .

Az SF és a vénás vérmintákat összegyűjtöttük és -80 ° C-on tároltuk; proteázinhibitorokat adtak a váll műtétekor, steril körülmények között. Milliplex ™ MAP készleteket (Millipore, Natick, MA, USA) használtunk a releváns adipokinek és gyulladásos citokinek három példányban történő kimutatására. Az összes mintát a BioPlex 200 olvasón olvastuk le.

Az immunvizsgálatok teljesítményjellemzőit az egyes analiták vizsgálati eljárásán belüli variációs együtthatóval határoztuk meg.

A kondrocita izolálása

A porcot azonnal szállítóközegbe helyeztük, és feldolgozásukig 4 ° C-on tartottuk. Röviden, a porcokat foszfáttal pufferolt sóoldattal mossuk, és egy tenyésztőedénybe helyezzük, amely DMEM-et tartalmaz, 10% marha-magzati szérummal (FBS) és hialuronidázzal kiegészítve. A mintákat egy éjszakán át 37 ° C-on inkubáltuk, és a következő napon leszűrtük, centrifugáltuk, újraszuszpendáltuk, megszámoltuk és lemezeztük.

Sejtkultúra

Humán máj HepG2 sejteket, emberi embrionális vese HEK293 sejteket, egér fibroblaszt C3H10T1/2 és egér prechondrocytás ATDC5 sejteket növesztettünk 10% FBS-sel kiegészített DMEM-ben. Az ATDC5 és a C3H10T1/2 sejteket inzulin és BMP2 hozzáadásával kondrocita sejtekké differenciáljuk. A mintákat tűn engedtük át, majd centrifugáltuk. A felülúszókat összegyűjtöttük és meghatároztuk a fehérjekoncentrációt.

Western blot elemzés

A mintákat SDS-poliakrilamid géleken futtattuk, és a blotokat AdipoR1, AdipoR2 és ObRb elleni antitestekkel vizsgáltuk.

Immunfluoreszcens mikroszkópia

A kondrocitákat 12 lyukú Falcon-csészékben tenyésztettük 18 mm-es üveg fedőlemezeken, 25 μg/ml poli-L-lizinnel bevonva. A sejteket rögzítettük és permeabilizáltuk, majd 1% szarvasmarha-szérum-albuminban inkubáltuk, majd egy éjszakán át 4 ° C-on hagytuk AdipoR1, AdipoR2, ObRb, kollagén 11, szarkóma aktin vagy kollagén 1 primer antitestekkel. Az összes fluoreszcencia képet Leica DMI 6000B fluoreszcens mikroszkóppal készítettük.

A folyamatos adatokat összehasonlítottuk a csoportok között a Kruskal-Wallis teszttel, míg a korrelációkat nemparametrikus Spearman-együtthatókkal határoztuk meg.

Külön lineáris regressziós modelleket építettünk a test habitus (BMI és WC) és a 3 függő változó: az SF LEP, az SF ADIPO és az SF rezisztin közötti kapcsolat értékelésére. Ezután a modelleket az életkorhoz és a nemhez igazították.

Ehhez a tanulmányhoz 35 beteg mintaméretét választották, 4 független változóra számítva a regressziós modellben, ezáltal kovariátonként> 8 eredményt engedélyezve. Az összes statisztikai elemzést az SPSS 13.0 verzióval (SPSS, Chicago, IL, USA) végeztük.

35 betegből álló mintánkban 15 férfi (43%) volt, átlagéletkoruk 63,0 év (SD 10,1) és átlagos BMI 28,3 kg/m 2 (SD 5,4).

Az adiponektin és leptin receptorok expressziója a váll porcában. A váll porc kondrocitáiból, az emberi máj (HepG2) és az embrionális vese (HEK293) sejtvonalakból kivont összes sejtlizátumot denaturáló géleken futtattuk, és Western blot alkalmazásával számszerűsítettük. Különböző mennyiségű sejtlizátumot töltöttünk be: (A) 2 μg, (B) 5 μg és (C) 10 μg az 1. típusú adiponektin receptorhoz; és (D1) 10 μg, (D2) 30 μg és (D3) 100 μg a 2. típusú adiponektin és a leptin receptorok esetében.